细胞毒性检测技术服务北京索莱宝科技有限公司

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技术服务信息

服务名称:细胞毒性检测技术服务
服务类别:细胞生物学服务 - 细胞毒性测试服务
价格:询价
允许参观:协商决定
所在区域:北京.北京
更新时间:2020/9/10 11:36:00
浏览人数:113
诚信指数:1407点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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技术服务详细描述

 MTT 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan,在特定溶剂存在的情况下,可以被完全溶解,然后通过酶标仪可以测定490nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。CCK-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。

样品要求:

培养瓶培养细胞,细胞汇合度需达到70%,灌满新鲜培养基至接近瓶口处,封口膜缠紧封口。

细胞如在冻存管中需要足量干冰寄送。

服务项目及收费标准:

服务项目

收费明细

周期(工作日)

MTT

550/

据细胞培养周期而定

CCK8

650/

据细胞培养周期而定

客户提供:

细胞(常规细胞系可由我公司提供,需要收取一定费用)

处理细胞所需药物

培养细胞需要如使用较为特殊培养基,也需要客户提供

服务说明:

MTT:

1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,分于96孔板,每孔180μL3000-10000个细胞/孔。

2.37℃、5%CO2 温箱培养使细胞贴壁,培养6-24小时。

3.加入适当浓度的受试化合物,继续培养适当时间。

4.小心吸去上清,加入90μ新鲜培养液,再加入10μL MTT 溶液,继续培养4 h

5.然后吸掉上清,每孔加入110μL Formazan 溶解液,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm 处测量各孔的吸光值。

6.同时设置调零孔(培养基、MTTFormazan 溶解液),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTTFormazan 溶解液),每组设定3复孔。

CCK-8:

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5 个细胞浓度梯度,每组3-6 个复孔。

3、接种后培养至细胞贴壁,然后加CCK-8 试剂培养一定时间后测定OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标(轴),OD 值为纵坐标(轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8 后的培养时间。)

二、细胞活性检测

1、在96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37,5% CO2 的条件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL 0.1M HCl 或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增殖-毒性检测

1、在96 孔板中配置100 μ的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时(在37 ℃,5% CO2 的条件下)。

2、向培养板加入10μ不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如:61224 48 小时)。

3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。

4、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

5、用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。

6、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL 0.1M HCl 或者1%SDS(W/V)液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

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